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摘要
为分析嗜酸乳杆菌内源性质粒pDX，并基于该质粒构建大肠杆菌-嗜酸乳杆菌穿梭载体。本研究从嗜酸乳杆菌XW118中分离获得内源性的质粒pDX，对其进行序列测定及功能分析，然后利用质粒pDX的复制子构建了能在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭的载体，并研究嗜酸乳杆菌的内源性质粒启动子在大肠杆菌中的活性和穿梭载体在乳酸菌中宿主的范围、转化效率和传代稳定性。结果显示嗜酸乳杆菌质粒pDX大小为2062 bp,GC含量为38.2%，包含4个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)，推定为滚环复制质粒。质粒pDX在嗜酸乳杆菌中的拷贝数最高为31.05。本研究构建了基于质粒pDX复制子和启动子的大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体。该载体可转化多种类型的乳酸菌，转化效率在0.24×10～2～2.75×10～3 CFU/μg(质粒量)之间，质粒丢失率在25.45%～48.36%之间。本研究通过构建获得能在大肠杆菌-乳酸菌穿梭的载体，并获得了在大肠杆菌中具有活性的乳酸菌内源性质粒的启动子，为乳酸菌基因工程和大肠杆菌代谢工程提供了新的操作途径。
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