金黄色葡萄球菌SarA蛋白原核表达及免疫原性研究

作者：程旭; 杨雨晴; 吴赛男; 侯勤龙; 李咏梅; 韩慧明^*

来源：北华大学学报(自然科学版), 2021, 22(01): 47-52.

• SarA
• 原核表达
• 免疫原性

目的构建SarA的原核表达载体,对SarA蛋白免疫原性进行初步研究.方法首先应用生物信息学方法对SarA基因进行分析;以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR扩增、酶切、连接等一系列反应进行原核重组质粒的构建; IPTG诱导原核重组质粒表达,对SarA蛋白进行纯化、浓缩,将浓缩后的蛋白与佐剂混合免疫家兔,收集血清,通过间接ELISA法检测血清抗体效价,并通过Western blot鉴定抗体特异性.结果成功构建重组表达质粒SarA-pET32a(+),通过IPTG诱导表达,获得以可溶形式高效表达的SarA蛋白,分子质量约为32 kDa.用纯化的SarA蛋白免疫家兔,获得了SarA多克隆抗体,其效价为1∶512 000.结论成功构建了SarA原核表达载体,且在大肠杆菌细胞中表达;得到了高效价和良好特异性的多克隆血清抗体,为进一步研究抗细菌生物膜疫苗奠定了基础.

• 单位
  基础医学院; 北华大学