H5亚型高致病性禽流感病毒微滴式数字PCR检测方法的建立与应用

作者：蒋文明; 刘朔; 李金平; 彭程; 尹馨; 于晓慧; 李阳; 王静静; 刘华雷^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(05): 960-970.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.05.16

• 禽流感病毒
• H5亚型高致病性禽流感病毒
• 微滴式数字PCR

为建立特异、灵敏的H5亚型高致病性禽流感病毒(high pathogenicity avian influenza virus, HPAIV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法，根据GISAID和GenBank公布的H5亚型HPAIVs HA基因的核苷酸序列，设计并合成引物和探针，对反应体系和条件进行优化，建立针对H5亚型HPAIVs的ddPCR检测方法，并对该方法的特异性、重复性以及敏感性进行评估。结果显示，引物探针浓度为900 nmol/L和250 nmol/L、退火温度为55℃、升降温速率为2.0℃/s时ddPCR反应效率最高。该方法可特异性检测H5亚型HPAIVs,对H9N2、H7N9等常见禽病病原均不能检出。该方法对标准品最低检测限为1.97拷贝/μL,敏感性比qPCR方法高10倍。组内和组间重复性试验的变异系数均小于5%。对80份临床样品检测结果显示，与金标准方法的符合率为100%。本研究建立的ddPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好，为H5亚型HPAIVs的诊断和检测以及精准防控提供了重要技术支撑。

• 单位
  中国动物卫生与流行病学中心