基于氧化应激和NLRP3炎性小体探讨锦鹤养心方总黄酮抗心肌缺血的作用机制

作者：程艳刚; 李国艳; 刘艳; 赵建斌; 李飞鹤; 李慧峰; 谭金燕; 杨炳友; 裴妙荣^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2018, 24(18): 93-100.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20181728

• 锦鹤养心方总黄酮
• 心肌缺血
• 氧化
• 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)
• 炎症

目的:研究锦鹤养心方总黄酮提取物对盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌缺血损伤保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:108只SPF级KM小鼠随机分为正常组,模型组,阳性药组(盐酸普萘洛尔,33 mg·kg-1),总黄酮提取物高、中、低剂量组(4.4,2.2,1.1 g·kg-1),给药组连续给药7 d,各组于第5天开始,除正常组外,其余各组小鼠均于给药1 h后皮下注射ISO 20 mg·kg-1,正常组小鼠皮下注射等剂量生理盐水,连续注射3 d,制备心肌缺血模型。造模24 h后取材,记录各组小鼠第1次注射ISO前及最后1次注射24 h后心电图;测定各组小鼠的心脏指数;用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌缺血面积;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),心肌钙蛋白I(c Tn I),乳酸脱氢酶(LDH),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移增加(P<0.01),血清CK-MB,c Tn I,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平显著升高,SOD的含量显著降低(P<0.01),心肌缺血面积显著增加(P<0.01),心肌组织损伤明显,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,锦鹤养心方总黄酮各剂量组小鼠Ⅱ导联心电图ST段位移降低(P<0.05,P<0.01),血清CK-MB,c Tn I,ALT,AST,LDH,MDA,IL-6,TNF-α,IL-1β含量及心脏指数水平降低,SOD的含量升高(P<0.05,P<0.01),心肌缺血面积降低(P<0.05,P<0.01),心肌缺血损伤明显减轻,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:锦鹤养心方总黄酮对心肌缺血损伤具有保护作用,且呈现一定的量效关系,该作用可能与提高机体抗氧化活性,减少氧化应激损伤,抑制NLRP3炎性小体活化有关。

• 单位
  黑龙江中医药大学; 山西中医药大学