分子信标用于活细胞内源性mRNA检测的实验研究

作者：何蓉蓉; 丁雪燕; 陈丹峰; 宋婧文; 荆清

来源：现代生物医学进展, 2016, 16(17): 3227-3231.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2016.17.006

• 分子信标(MB)
• 内源性
• 熔解曲线
• SLO
• 斑马鱼

目的:观察分子信标(molecular beacons,MB)在活细胞内及在体水平对内源性m RNA检测的可行性。方法:合成增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,e GFP)的MB,模拟体内条件,分别从MB的稳定性、与目标基因结合的特异性和敏感性进行检测,并通过在活细胞和斑马鱼胚胎内的应用来观察其对内外源性m RNA的检测的可行性。结果:MB在37℃条件下在体外48小时内经琼脂糖凝胶电泳鉴定未见降解,熔解曲线结果显示荧光强度差异无统计学意义(P>0.05);并且只有在靶序列存在的条件下MB的信号强度显著增强,MB的信号强度与靶基因浓度呈正相关并能基本稳定存在;经e GFP和靶向e GFP的MB共转染的293T细胞能看到荧光表达,靶向e GFP的MB可特异性结合细胞内e GFP的m RNA;在单细胞期斑马鱼胚胎内共注射MB以及目标单链后能观察到荧光表达。结论:结果表明分子信标可用于活细胞内内源性m RNA的检测。

• 单位
  上海市浦东新区公利医院; 中国人民解放军第一一七医院; 上海长海医院