新型冠状病毒核酸检测试剂盒中酶的性能比较研究

作者：杨镇州; 李妍; 杨雪; **; 梁文

来源：生物技术进展, 2021, 11(06): 777-782.

DOI：10.19586/j.2095-2341.2021.0105

• 新型冠状病毒
• RT-PCR
• 逆转录
• PCR效率

新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒中酶的性能对检测效果有决定性作用。为探索逆转录酶和DNA聚合酶性能的快速评价方法,采用常用SARS-CoV-2核酸检测试剂盒,以SARS-CoV-2核酸标准物质为考察依据,对试剂盒中逆转录酶、DNA聚合酶的技术性能进行综合评价研究。第一步,通过分析cDNA产物与目标RNA浓度比值,考察逆转录酶的逆转录效率;第二步,以相同的cDNA为目标样品,进行实时荧光定量PCR分析;第三步,以新冠病毒RNA标准物质为目标样品,进行逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR),比较试剂盒的扩增效率;第四步,考察试剂盒中酶的热稳定性。结果显示,所考察的试剂盒产品逆转录酶的逆转录效率为6.5%～80.7%,DNA聚合酶的扩增效率为90.4%～119.7%,而总体逆转录PCR的扩增效率为90.7%～102.4%。热稳定性评价结果显示,初始较好的酶活性可能在保存和运输期间发生质量变化。通过反映目前新冠病毒核酸检测试剂盒中酶的质量水平,以期对相关质控工作提供一定参考。

• 单位
  上海市计量测试技术研究院