固醇调节元件结合蛋白1c抑制骨骼肌胰岛素受体底物1基因表达的分子机制

作者：吴文君; 时俊锋; 汤孙寅炎; 陈莹莹; 尹雯雯; 朱大龙; 毕艳^*

来源：中华糖尿病杂志, 2015, 7(12): 754-758.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1674-5809.2015.12.008

• 固醇调节元件结合蛋白1c
• 棕榈酸
• 骨骼肌
• 胰岛素受体底物1
• 分子机制

目的探讨固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)抑制骨骼肌细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)基因转录的具体分子机制。方法将SREBP-1c表达质粒、IRS-1启动子荧光素酶报告质粒及海肾质粒胸腺嘧啶核苷激酶启动子(pRL-TK)采用Lipofectamin 2000共转染L6细胞, 以pCDNA3.1空质粒为对照, 36 h后裂解细胞按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书检测荧光素酶。将表达SREBP-1c的腺病毒感染L6肌管细胞, 以表达绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒作对照, 感染48 h后收取细胞抽提核蛋白, 进行凝胶迁移滞后实验(EMSA)和染色质免疫共沉淀(CHIP)实验, 分析SREBP-1c转录因子与IRS-1启动子区域的相互作用。组间比较采用双因素方差分析。结果荧光素酶截断实验显示IRS-1启动子区域-450～-210 bp为SREBP-1c的作用范围。序列分析显示IRS-1启动子-302～-292 bp处存在SREBP-1c潜在的结合序列GCCTCCCGAG, 该序列突变为TGTTAAATTA, 荧光素酶实验显示SREBP-1c抑制野生型IRS-1启动子活性, 而对突变型IRS-1启动子无抑制作用(分别为7.03± 1.28比19.09±2.45、3.55±1.68比3.96±1.09, F=114.437、0.251, 均P>0.05);EMSA结果显示SREBP-1c蛋白与野生型探针直接结合, 而不被突变探针所竞争。CHIP结果显示SREBP-1c可直接结合到IRS-1的启动子区域, 定量分析显示PA组细胞SREBP-1c结合到IRS-1启动子区域的量为对照组的2倍, SREBP-1c过表达组为GFP组的5倍(分别为2.15±0.03比1.07±0.24, 5.48±1.28比0.86±0.19, t=6.8775、5.495, 均P<0.05)。结论 SREBP-1c通过直接结合到IRS-1启动子区域的非典型固醇反应元件序列抑制IRS-1基因转录表达, 继而影响胰岛素信号通路的转导。

• 单位
  南京医科大学; 南京大学医学院附属鼓楼医院; 无锡市人民医院; 南京市第一医院