科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨在脂多糖(LPS)诱导血脑屏障(BBB)破坏中紧密连接Occludin、ZO-1表达的变化以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用机制。方法利用MTT法检测不同浓度LPS以及SP600125(JNK信号通路抑制剂)对人脑微血管内皮细胞(h CMEC/D3)活力的影响。Western blot法检测不同浓度LPS对Occludin、ZO-1蛋白表达的影响。用SP600125阻断JNK信号通路,Western blot法检测LPS诱导的JNK磷酸化水平、Occludin和ZO-1蛋白表达的变化,qRT-PCR法检测Occludin、ZO-1及MMP-9 mRNA表达的变化。用SB-3CT特异性抑制MMP-9活性,Western blot法检测LPS诱导的Occludin蛋白表达的变化。结果 LPS、SP600125浓度分别在10μg/ml(0.19±0.02)和0.22μg/ml(0.18±0.01)以下时对h CMEC/D3细胞活力无明显影响(P>0.05)。不同浓度LPS(1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)处理h CMEC/D3后Occludin和ZO-1蛋白的表达量均下降。LPS处理h CMEC/D3后JNK磷酸化水平增高,而抑制JNK磷酸化可以明显上调LPS诱导的Occludin蛋白(0.87±0.03、P<0.001)及其mRNA(1.00±0.09、P<0.05)的表达,但对ZO-1蛋白(1.14±0.06、P>0.05)及其mRNA(0.81±0.03、P>0.05)的表达无明显影响。另外,抑制MMP-9的活性可以明显上调Occludin蛋白的表达(0.53±0.06、P<0.01),阻断JNK信号通路可显著降低LPS诱导的MMP-9的高表达(0.77±0.08、P<0.001)。结论 LPS可下调紧密连接Occludin、ZO-1蛋白及其mRNA的表达导致血脑屏障破坏;LPS可通过激活JNK信号通路,调节Occludin蛋白及其mRNA的表达,而对ZO-1蛋白及其mRNA表达的影响可能通过其他信号通路实现;LPS诱导Occludin蛋白的下调可能与MMP-9的高表达有关,JNK信号通路可能参与了此过程的调控。
-
单位神经内科; 广西医科大学第一附属医院
