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摘要
为分析溶酶体α-甘露糖苷酶(lysosomalα-mannosidase, LAM)亚基结构与酶活性的关系，分别截短、扩增含有山羊溶酶体α-甘露糖苷酶(Capra hircas LAM,ChLAM)高度保守活性位点的亚基片段ChA、ChC、ChD和ChT,将其作为目的基因构建酵母表达载体pPIC9K-ChA、pPIC9K-ChC、pPIC9K-ChD和pPIC9K-ChT,线性化后电转至酵母GS115感受态细胞，以1%甲醇诱导表达，SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达，并对表达产物进行LAM活性检测。结果显示，毕赤酵母中成功表达了有活性的ChLAMt蛋白，相对分子质量约为90 kDa,活性为35 U;而ChA、ChC、ChD表达产物不具有酶的活性。ChLAMt酶活性最适温度为45～55℃,最适pH5.5,Zn2+和Ca2+对ChLAMt酶活性有促进作用，ChLAMt蛋白与野生型全长编码的ChLAM蛋白有相似的酶活特性，说明A、C、D这3个亚基上高度保守的活性位点共同参与酶的催化反应，为ChLAM的研究提供了资料。
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