特异性shRNA抑制人近端肾小管上皮细胞Toll样受体4的表达

作者：聂祥智; 朱忠华; 邓安国; 杨晓

来源：武汉大学学报(医学版), 2007, (03): 287-291.

• 短发卡RNA
• RNA干扰
• 人近端肾小管上皮细胞
• Toll样受体4

目的:研究RNA干扰法对人近端肾小管上皮细胞(HKC)中Toll样受体4(TLR4)表达的抑制作用。方法:将针对TLR4分子设计的采用体外转录生物合成的特异性短发卡RNA(shRNA)双链分子用脂质体转染的方法导入体外培养的HKC;应用免疫荧光染色在共聚焦显微镜下观察TLR4的分布及表达强弱;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测TLR4及内参照-βactin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果:干扰组TLR4的荧光强度显著低于对照组,其mRNA和蛋白的表达量分别下降了67%和62%。同时观察到TLR4主要分布于HKC细胞的胞膜及胞质区。结论:采用生物体外转录的方法成功合成针对TLR4的shRNA双链分子,并有效地转入HKC细胞中使TLR4的表达下调。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院