微小RNA-214-3p介导神经营养酪氨酸激酶受体2型通路调节血管内皮生长因子旁分泌在骨关节炎发展中的作用

作者：任泰超; 肖鹏^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(01): 116-119.

• 微小RNA
• 血管内皮生长因子
• 骨关节炎

目的探讨微小RNA(miR)-214-3p在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达及其调节内皮细胞迁移和血管生成的机制。方法选取2020年6月至2020年12月在郑州大学第一附属医院接受全膝关节置换的16例OA患者及12例无膝关节疾病但因创伤导致下肢截肢的患者分别作为OA组和健康组, 获取软骨标本, 提取软骨细胞。采用蛋白印迹分析和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-3p在软骨细胞中的表达水平。通过创面愈合实验、小管形成实验、酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞的迁移率、血管生成率、血管内皮生长因子(VEGF)分泌情况。采用生物信息学分析、双荧光素酶分析等方法分析miR-214-3p与神经营养酪氨酸激酶受体2型(TrkB)的关系。采用方差分析(ANOVA)和t检验。结果 TrkB在OA组中的表达水平明显高于健康组(2.13±0.41比0.92±0.21, t=9.318, P<0.01)。miR-214-3p在OA组中的表达明显低于健康组(0.26±0.12比1.12±0.31, t=-10.177, P<0.01), 差异均有统计学意义。OA组miR-214-3p表达水平与TrkB表达水平呈负相关(r=-0.730, P<0.05), 健康组中miR-214-3p表达水平与TrkB表达水平呈负相关(r=-0.705, P<0.05)。TargetScan数据库预测了miR-214-3p和TrkB的靶向结合位点, 双荧光素酶实验验证了TrkB与miR-214-3p的靶向结合。TrkB过表达组VEGF水平高于空载体组[(221.3±5.2) ng/L比(137.2±4.8) ng/L, t=43.742, P<0.01]、内皮细胞迁移率高于空载体组(1.71±0.22比0.98±0.11, t=10.516, P<0.05)、血管生成率高于空载体组(1.41±0.12比0.99±0.10, t=9.822, P<0.05), 差异均有统计学意义。下调OA组的miR-214-3p表达后, VEGF表达水平升高0.95倍(t=5.245, P<0.01), 内皮细胞迁移率增加1.12倍(t=3.283, P<0.01), 血管生成率增加0.52倍(t=1.174, P<0.01), 差异均有统计学意义。结论软骨细胞中TrkB信号通路旁分泌VEGF的激活是由miR-214-3p介导的, 在OA发展过程中调控内皮细胞迁移和血管生成。

• 单位
  郑州大学第一附属医院