登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究

作者：陈亚洁; 李劲松

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2005, (11): 890-894.

• 登革病毒
• 非结构蛋白NS3
• NTPase
• 原核表达 Dengue virus
• Nonstructural protein 3
• NTPase
• Prokaryotic expression

目的表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase/RNA解旋酶结构域(dNS3),纯化表达产物并对其活性作初步研究。方法提取感染登革2型病毒的BHK221细胞总RNA,RT2PCR扩增目的基因,经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a,转化宿主菌BL21(DE3),优化诱导表达条件,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白。表达产物经亲和层析纯化,超滤浓缩脱盐,孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性。结果成功构建重组表达载体pET28a2dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达,纯化产物经测定具有良好的NTPase活性及抗原性。体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5(RDRP)对dNS3...

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室