白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白表达纯化及活性研究

作者：宫晓建; 魏永永; 张苏; 冀成法; 马鲁南; 刘忠; 张贵民^*

来源：生物技术, 2021, 31(02): 129-133.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.02.0019

• TNHH
• 蛋白表达
• 蛋白纯化
• 活性

[目的]采用大肠杆菌表达白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白,表达纯化后进行抗细胞黏附活性及抑制凝血酶活性的功能研究。[方法]将编码白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的基因构建到pET28a载体上,转化菌株Rosetta(DE3)并经IPTG诱导表达后分别经镍柱和分子筛进一步纯化,使用实时细胞分析仪和血凝仪分别测定了白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白的抗粘附活性及抗凝血活性。[结果]成功表达并纯化出白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白,并测定了嵌合蛋白生化及细胞水平活性。[结论]白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。经亲和层析和分子筛层析纯化,蛋白纯度达到90%以上,该蛋白同时具有抗细胞粘附及抗凝血双功能,为后续成药性开发奠定基础。

• 单位
  鲁南制药集团股份有限公司