以腺相关病毒为载体的小干扰RNA对肝星状细胞中金属蛋白酶组织抑制因子的抑制作用

作者：丛敏; 王萍; 刘天会; 徐雍; 卢炎; 唐淑珍; 刘晓明; 王宝恩; 贾继东; 尤红

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2006, (11): 994-999.

• 金属蛋白酶组织抑制因子
• 小干扰RNA
• 腺相关病毒
• 肝星状细胞

目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1的表达抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选一段22bp片段,在体外构建为短发夹siRNA (shon hairpin siRNA,shRNA)表达载体后,将其包装为重组AAV并感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后,于感染后30d及90d应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1 mRNA及蛋白质表达情况,同时通过PCR技术以感染后细胞的基因组DNA为模板扩增外源基因验证其长效表达。结果经PCR、酶切及序列测定证实含有siRNA-TIMP-1基因的重组AAV载体质粒已成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,感染后30d及90d细胞TIMP-1 mRNA水平明显降低(P＜0．01),感染后30d TIMP-1蛋白表达水平较对照组细胞相比下降约60％,而感染后90d,TIMP-1蛋白表达几乎下降90％。PCR结果显示在重组病毒感染后90d细胞基因组DNA中仍可扩增出外源基因,证实外源基因可长期表达。结论重组病毒rAAV/siPtNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因的表达。

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院