精氨酸代琥珀酸合成酶-1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

作者：夏芷晴; 张紫晨; 付麒; 何云强; 杨涛; 孙敏^*

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2023, 43(06): 764-771.

DOI：10.7655/NYDXBNS20230603

• 精氨酸代琥珀酸合成酶
• 胰岛β细胞
• 增殖
• 凋亡

目的：探讨精氨酸代琥珀酸合成酶-1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法：利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β-TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU）和CCK-8检测细胞增殖能力；Annexin V-PI流式细胞术和原位末端转移酶标记技术（terminal dUTP nick-end labeling assay,TUNEL）检测细胞凋亡水平；Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell leukaemia-2,Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor,AIF）、细胞核增殖抗原（Ki67）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian rapamycin target protein,m TOR）的表达水平；RT-qPCR检测AIF、Ki67和mTOR mRNA水平。结果：(1)与对照相比，敲低ASS1后，胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力降低，TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率升高。胰岛β细胞内AIF表达量明显升高，Bax/Bcl-2比值下降，Caspase-3活性降低。(2)过表达ASS1后，TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率均较对照组降低，伴随胰岛β细胞内Ki67和mTOR表达量升高。但胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力无明显变化。结论：ASS1过表达可能激活m TOR信号通路促进胰岛β细胞增殖；ASS1表达降低时，胰岛β细胞可通过AIF途径启动细胞凋亡。ASS1可能在胰岛β细胞的增殖和凋亡中发挥一定调控作用。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院