基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1抑制探讨二蒽酮的潜在肝毒性

作者：汪祺; 杨建波; 文海若^*; 马双成^*

来源：药物评价研究, 2022, 45(09): 1779-1785.

• 分子对接
• 胆红素代谢酶
• UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)
• 何首乌
• 二蒽酮
• 肝毒性

目的 基于胆红素代谢酶UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)靶点评价何首乌中二蒽酮类成分的潜在肝毒性。方法 采用Discovery Studio 2.5软件的From Receptor Cavities模块对UGT1A1酶蛋白空腔进行自动识别，将反式-大黄素-大黄素二蒽酮(trans-EMD)、顺式-大黄素-大黄素二蒽酮(cis-EMD)与UGT1A1酶蛋白进行对接，确定待测单体与酶蛋白的作用方式以及连接的紧密程度；应用大鼠肝微粒体孵育体系，加入底物胆红素对照品溶液，评价trans-EMD、cis-EMD(0.037、0.110、0.330、0.990、2.970μg·mL-1)对UGT1A1酶的作用，同时启动Ⅰ、Ⅱ相代谢，以表观抑制常数(Ki)为评价指标；CCK-8法检测trans-EMD、cis-EMD(0.04、0.10、0.30、1.00、3.00μg·mL-1)作用24 h对HepaRG细胞的毒性作用；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测trans-EMD、cis-EMD(0.04、0.30、3.00μg·mL-1)作用24 h对HepaRG细胞UGT1A1 mRNA水平的影响。结果 分子对接实验显示trans-EMD、cis-EMD可与UGT1A1结合于site F,2个化合物10或10’位不同氢键构型可引起化合物空间构型的改变，影响其与UGT1A1的结合强弱；体外酶抑制实验表明trans-EMD、cis-EMD对UGT1A1酶均表现出竞争型抑制作用，抑制作用较强；细胞毒性实验表明trans-EMD(IC50为1.333μg·mL-1)和cis-EMD(IC50为1.715μg·mL-1)均表现出较明显的HepaRG细胞毒性，IC50值较小；与对照组比较，trans-EMD和cis-EMD 0.30、3.00μg·mL-1均可显著下调UGT1A1 mRNA表达水平(P<0.05)，且作用存在浓度相关性。结论 具有大黄素(10→10’)大黄素或大黄素(10→10’)大黄素母核结构的二蒽酮化合物是一类具有潜在肝毒性的化合物，其毒性作用可能与抑制胆红素代谢酶UGT1A1相关。

• 单位
  中国食品药品检定研究院