摘要
目的研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对中波紫外线(UVB)应激性衰老成纤维细胞(UVB-SIPS-FB)的氧化损伤和凋亡作用。方法正常成纤维细胞及UVB-SIPS-FB均分为2h和6h孵育组, 每组内再分为7组:对照组、ALA组、100 J/cm2照光组、3组不同红光照射剂量ALA-PDT处理组(25 J/cm2组、50 J/cm2组、100 J/cm2组)及抗氧化剂NAC+ 50 J/cm2红光照射ALA-PDT处理组。采用635 nm红光(能量密度50 mW/cm2)照射处理后, 使用荧光显微镜、流式细胞仪检测各组细胞中活性氧及线粒体膜电位水平;Hoechst染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。数据用SPSS 13.0软件分析, 多组间均数行单因素方差分析, 结合q检验。结果孵育2 h, 25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为7.34%±0.87%、8.39%±1.16%、17.03%±1.29%)较对照组(3.81%±0.59%)上升(F=102.70, 均P<0.05), NAC+ 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(5.35%±0.58%)下降(P<0.05);孵育6 h, 25、50、100 J/cm2 ALA-PDT组UVB-SIPS-FB凋亡率(分别为13.85%±1.71%、23.40%±2.14%、41.02%±2.73%)较对照组(5.09%±1.64%)显著上升(F=106.00, 均P<0.05), NAC+ 50 J/cm2 ALA-PDT组凋亡率(9.97%±3.23%)显著下降(P<0.05)。单纯ALA组或照光组UVB-SIPS-FB凋亡率与对照组差异均无统计学意义。ALA-PDT处理组细胞活性氧荧光强度显著上升, 线粒体去极化增强, 这些现象与ALA孵育时间及红光照射剂量均呈量效依赖性关系。使用抗氧化剂NAC预处理可以减少ALA-PDT诱导的活性氧增多及线粒体去极化增强, 与凋亡率变化一致。结论 ALA-PDT可诱导UVB-SIPS-FB出现明显的细胞凋亡, 其作用机制可能与ALA-PDT对细胞的氧化损伤有关。
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单位南京医科大学第一附属医院