吴茱萸碱通过调控Hedgehog信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡的研究

作者：孙强; 刘茂伦; 杨寒; 任珊; 赵晖; 明天琪; 唐顺; 陶秋; 周丽娟; 徐海波^*

来源：中药药理与临床, 2022, 38(01): 71-77.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.2022.01.005

• 吴茱萸碱
• 结直肠癌
• 细胞增殖
• 细胞迁移
• 细胞凋亡

目的:基于Hedgehog信号通路研究吴茱萸碱抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖和诱导凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞和人正常结肠上皮NCM-460细胞增殖的影响；显微镜观察吴茱萸碱对HCT-116细胞形态的影响；结晶紫染色考察吴茱萸碱对HCT-116细胞克隆形成能力的影响；细胞划痕试验检测吴茱萸碱对细胞水平迁移的影响；Hoechest33324/PI染色观察吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡的影响；试剂盒检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡相关因子Caspase-9和Caspase-3活性的影响；蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、Gli1、SMO、c-Myc表达的影响；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA表达的影响。结果:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的增殖且在高剂量和长时间给药情况下对人正常结肠上皮NCM-460细胞产生一定的抑制效应。此外，HCT-116细胞经吴茱萸碱5、10、20μmol/L干预后形态发生改变，细胞水平迁移能力和克隆形成能力显著下降，染色质固缩，细胞核呈致密浓染，Caspase-9和Caspase-3活性升高(P<0.01);吴茱萸碱10、20μmol/L作用HCT-116细胞48 h后，Bax mRNA和蛋白表达随吴茱萸碱浓度增高而上调，Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);吴茱萸10、20μmol/L碱诱导了周期调节因子Cyclin D1 mRNA和蛋白的下调(P<0.01);Hedgehog信号通路中的关键因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA和蛋白表达也在吴茱萸碱干预后显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的生长、增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能涉及抑制Hedgehog信号通路的激活。

• 单位
  四川省中医药科学院; 成都中医药大学