非洲猪瘟病毒p30蛋白表达与单克隆抗体制备

作者：孟鑫; 李松楠; 王安铖; 闫婉婉; 李俊波; 陈玲超; 童武; 孔宁; 单同领; 于海; 童光志; 邢明伟; 郑浩^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-8.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20231201.002

• 非洲猪瘟
• p30蛋白
• 单克隆抗体
• 原核表达
• 真核表达

为了制备非洲猪瘟病毒（ASFV）p30蛋白的特异性单克隆抗体，本研究将p30分别克隆到真核和原核表达载体中，构建了重组的pcDNA3.1-p30以及pColdI-p30质粒。将重组质粒pColdI-p30转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导和纯化，获得p30蛋白。随后，将其免疫小鼠，通过细胞融合、筛选、亚克隆获得一株阳性的杂交瘤细胞，命名为5E15。通过间接ELISA，Western blot以及间接免疫荧光鉴定其特异性。结果显示单抗5E15识别真核和原核表达的p30重组蛋白。重组质粒pcDNA3.1-p30用于转染293T细胞，免疫荧光可观察到细胞膜上的特异性绿色荧光。本研究通过表达，纯化获得ASFV p30重组蛋白。并成功制备了一株抗p30的单克隆抗体，为p30蛋白功能研究，非洲猪瘟诊断研究提供了重要材料。

• 单位
  安徽农业大学; 生命科学学院; 中国农业科学院上海兽医研究所; 东北林业大学