猪Sirt5基因的克隆及其腺病毒载体的构建和鉴定

作者：黄魁英; 冯永达; 明飞平; 肖安吉; 卢志鹏; 楚品品; 黄瀚威; 谭家裕; 夏枫耿; 黄朝远; 杨军; 蔡海明; 马苗鹏; 张玲华

来源：中国兽医杂志, 2016, 52(03): 3-5.

• 猪
• Sirt5基因
• 重组
• 腺病毒

为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因,并构建腺病毒载体,提取长白猪脑组织总RNA,利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因。再将此基因克隆至穿梭载体上,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-IRES-Sirt5。经酶切线性化,电击转化已含骨架载体pAdEasy-1DNA的BJ5183+感受态菌,得到重组腺病毒质粒Ad-Sirt5。重组腺病毒质粒经酶切线性化鉴定。结果本试验获得的Sirt5基因与NCBI公布序列一致。利用细菌同源重组技术构建重组腺病毒载体,经酶切鉴定正确。表明本试验成功克隆得到Sirt5基因,并成功构建Sirt5基因的腺病毒载体。

• 单位
  广州市微生物研究所; 广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室; 华南农业大学