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摘要
目的 通过蛋白质磷酸化修饰组学质谱测序，分析蛋白激酶WNK2在卵巢癌细胞中调控的生物过程。方法 用WNK2干扰慢病毒感染SKOV3细胞系，药筛获得稳转细胞株，提取总蛋白进行蛋白质磷酸化修饰组学质谱测序，根据生物信息学分析干扰WNK2前后SKOV3细胞中蛋白质磷酸化水平的变化，筛选磷酸化差异蛋白，KEGG及GO富集分析获取差异蛋白在卵巢癌细胞中调控的生物学过程并进行实验验证。结果 通过生物信息学分析磷酸化修饰组学质谱数据，结果显示干扰WNK2后，SKOV3细胞中共有745个蛋白磷酸化水平显著下降，其中包含1 078个磷酸化修饰位点发生变化，328个蛋白磷酸化水平显著上升，共415个磷酸化修饰位点发生变化。将磷酸化水平发生变化的差异蛋白进行KEGG、GO富集分析，发现WNK2主要参与了细胞骨架形成、信号传导、细胞组成、激酶活性调控等生物过程。干扰或过表达WNK2后，利用鬼笔环肽进行细胞骨架染色，结果显示，干扰WNK2后，细胞骨架断裂，排列紊乱；过表达WNK2后，细胞骨架重排增强。结论 WNK2通过调控vimentin等蛋白的磷酸化水平参与卵巢癌细胞骨架形成过程。
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单位中南大学; 公共卫生学院; 重庆市人民医院; 第三军医大学; 生命科学学院; 第一附属医院妇产科; 中国人民解放军陆军军医大学
