半夏PtPAL基因的克隆、表达与酶动力学分析

作者：何潇; 刘兴; 辛正琦; 谢海艳; 辛余凤; 吴能表^*

来源：作物学报, 2021, 47(10): 1941-1952.

• 半夏
• 麻黄碱
• 苯丙氨酸解氨酶
• 基因克隆
• 表达分析
• 酶动力学分析

本研究以半夏为研究对象,基于其转录组数据克隆获得1个苯丙氨酸解氨酶基因,命名为PtPAL,通过DNAMAN、MEGA等生物信息学软件进行序列结构与系统进化分析表明,该基因核酸序列长度为2289 bp,编码762个氨基酸,终止密码子为TAA,PtPAL与单子叶植物百合PAL相似度达78%,具有PAL-HAL、PLN02457、pheamlyase、Lyasearomatic及HutH结构域,属于苯丙氨酸解氨酶家族成员(LyaseIlike Superfamily)。半夏PtPAL与单子叶植物百合、菠萝和油棕亲缘关系较近,归于单子叶植物。采用实时荧光定量PCR分析PtPAL在不同组织间的表达情况表明,PtPAL基因在叶中表达量最高,其次是块茎和根,花中表达量最低。通过对半夏PtPAL基因进行功能表达分析发现, PtPAL重组蛋白可以高效催化L-Phe生成t-CA,且催化反应最适pH与温度分别为9.0、70℃; PtPAL的Km、Vmax、Kcat和Kcat/Km分别为0.89 mmol L-1、63.96 nKat mg–1、6.56 s–1和7.37×103 s–1 M–1。进一步探究金属离子对PtPAL酶活性的影响表明, Ba2+显著增强了PtPAL酶活性, Mn2+、Co2+、Cu2+及Zn2+抑制了PtPAL酶活性。本研究为进一步研究PtPAL的功能特点及半夏苯丙胺类生物碱代谢途径奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 三峡库区生态环境教育部重点实验室; 西南大学