SYBR Green荧光PCR检测美洲钩虫方法的建立

作者：汪家旭; 黄建炜; 叶曦; 李国伟; 牛建军

来源：中国人兽共患病学报, 2010, (12): 1110-1113.

• 美洲钩虫
• rDNAITS-2序列
• 荧光定量PCR
• SYBR Green Ⅰ Necator americanus
• rDNA ITS-2 sequence
• real-time PCR
• SYBR Green I

目的建立荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法。方法提取虫体基因组DNA、根据GenBank中美洲钩虫ITS-2序列设计特异引物,PCR扩增ITS-2序列、克隆、测序和比对。常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做灵敏性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线的吸收峰单一,实验重复性良好。结论成功构建了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测美洲钩虫的方法,可用于快速、准确、定量检测美洲钩虫。

• 单位
  厦门市疾病预防控制中心