miRNA-193b-5p抑制转录调节因子CITED2表达对黑素合成的影响

作者：杨荷丹; 丁徽; 方富民; 郑慧颖; 张晓丽; 刘杏; 葛一平^*; 杨寅^*; 林彤^*

来源：中华皮肤科杂志, 2023, 56(01).

• 黑素细胞
• 黑素瘤细胞
• 黑素合成
• CITED2
• miRNA-193b-5p

目的初步探讨miRNA(miR)-193b-5p对黑素合成的影响及可能机制。方法从健康男性包皮环切术后废弃的正常包皮组织中分离培养人原代黑素细胞。分别转染miR-NC模拟物(miR-NC mimics组)和miR-193b-5p模拟物(miR-193b-5p mimics组)至人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞, 转染48 h时实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-193b-5p的过表达效率, 转染72 h时Western印迹检测黑素合成相关蛋白酪氨酸酶和小眼畸形相关转录因子的表达, 转染1周时采用氢氧化钠法测定细胞中黑素含量。通过TargetScan网站预测miR-193b-5p的靶基因并采用双荧光素酶报告实验验证, RT-qPCR及Western印迹检测miR-193b-5p过表达后该靶基因mRNA和蛋白表达水平的变化。两组间比较采用两独立样本t检验。结果人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞中, miR-193b-5p mimics组miR-193b-5p的表达水平均显著高于miR-NC mimics组, t值分别为65.57、22.49, 均P < 0.001, 且miR-193b-5p mimics组黑素含量(0.091 ± 0.007、0.130 ± 0.004)显著低于miR-NC mimics组(0.117 ± 0.002、0.188 ± 0.032), t值分别为5.98、3.24, P值分别< 0.01、< 0.05。Western印迹检测显示, 人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞中, miR-193b-5p mimics组黑素合成相关蛋白酪氨酸酶及小眼畸形相关转录因子的表达均显著低于miR-NC mimics组(均P < 0.05)。通过TargetScan预测及双荧光素酶报告实验验证, 转录调节因子CITED2的3′非翻译区存在miR-193b-5p的结合位点。人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1中上调miR-193b-5p表达后, CITED2 mRNA及蛋白的表达水平均显著低于miR-NC mimics组(均P<0.05)。结论 miR-193b-5p过表达可下调黑素合成相关蛋白酪氨酸酶及小眼畸形相关转录因子的表达, 抑制黑素合成, 该过程与靶向抑制CITED2的表达有关。

• 单位
  中国医学科学院; 北京协和医学院