HPV16E7蛋白编码基因原核表达与鉴定

作者：施桥发; 王保宁; 李虹; 魏晓丽; 张卫东; 曹康; 蒋忠华; 李明远

来源：四川大学学报（医学版）, 2006, (02): 187-190.

• HPV16
• 原核表达
• SDS-PAGE
• 免疫印迹

目的研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16E7蛋白原核表达质粒进行构建、表达和鉴定。方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16E7基因,经BamH和Hind双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选。经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot检测目标蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达质粒pET32/E7,HPV16E7-TRX融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达,在1mmol/LIPTG、30℃诱导条件下融合蛋白表达量占菌体总蛋白的30%左右。结论pET32/E7原核表达质粒的构建、HPV16E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础。

• 单位
  成都医学院; 基础医学院; 四川大学; 新疆医科大学