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摘要
目的探讨EV71病毒2B基因对EV71病毒诱导细胞凋亡的影响。方法设计、合成靶向EV71病毒2B基因的siRNA, PCR验证干扰效果,筛选最优siRNA浓度;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)转染后接种EV71病毒,通过普通显微镜下细胞形态观察、细胞存活率测定、培养上清病毒滴度测定验证2B基因siRNA对病毒感染的抑制作用;通过流式细胞术检测细胞周期变化;通过Westem blotting检测Caspase3等凋亡蛋白,探讨凋亡通路上关键蛋白的改变。结果靶向EV71病毒2B基因的siRNA在100 nM浓度下具有最优的基因沉默效果,EV71病毒感染前经转染处理的细胞存活率增高、上清病毒滴度降低、细胞周期阻滞减轻、凋亡蛋白Caspase3激活减少(均P<0.05)。结论 EV71病毒2B基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制病毒诱导的细胞凋亡。
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