暴马桑黄细胞色素P450家族CYP5150AW6基因克隆及表达分析

作者：李亚伟; 刘增才; 孙婷婷; 乌木提·巴合提别克; 邹莉^*

来源：中草药, 2022, 53(11): 3448-3455.

• 暴马桑黄
• 细胞色素P450基因
• 生长发育
• 表达分析
• 荧光定量PCR

目的 为深入了解细胞色素P450家族CYP5150AW6基因在暴马桑黄Sanghuangporus baumii生长发育调控中的功能。方法 采用PCR技术获得目的基因的c DNA序列全长，通过生物信息学在线软件分析其编码的氨基酸序列；采用同源重组的方法构建原核表达载体；采用荧光定量PCR技术分析其不同发育阶段的表达特性。结果 暴马桑黄中克隆得到的基因开放阅读框（open reading frame,ORF）序列全长1758 bp，编码585个氨基酸，相对分子质量为66 080，经国际P450命名委员会命名为CYP5150AW6；跨膜区预测表明CYP5150AW6蛋白不具有跨膜结构；亚细胞定位显示CYP5150AW6蛋白在细胞质和线粒体中修饰合成；系统进化分析结果表明，暴马桑黄CYP5150AW6蛋白与灵芝CYP5150L8蛋白亲缘关系最近，符合物种分类原则；SDS-PAGE结果证实在75 000～100 000出现目的蛋白条带（包含20 000的标签蛋白），说明所获得的基因能够成功表达出蛋白；从荧光定量分析结果中可以看出CYP5150AW6基因转录水平从菌丝体阶段到子实体阶段生长逐渐升高，并且在子实体阶段达到最高，说明该基因可能与暴马桑黄的生长发育相关。结论 通过对CYP5150AW6基因的鉴定与分析，为进一步研究该基因在暴马桑黄生长发育调控过程的功能提供了理论依据。

• 单位
  哈尔滨学院; 东北林业大学