α-硫辛酸对缺血再灌注诱导的PC12细胞应激性凋亡抑制作用的研究

作者：谢鹏; 任真奎; 吕菊; 胡玉梅; 吴昌学^*; 禹文峰^*

来源：贵州医科大学学报, 2020, 45(04): 373-386.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2020.04.001

• 再灌注损伤
• 大鼠
• α-硫辛酸
• 肾上腺嗜铬神经瘤细胞
• 细胞损伤
• 氧糖剥夺/再灌注
• 内质网压力介导的凋亡

目的:探讨α-硫辛酸(α-LA)抑制缺血再灌注诱导的大鼠肾上腺嗜铬神经瘤细胞(PC12)内质网应激性凋亡的分子机制。方法:传代培养PC12细胞分为正常组(Control组)、氧糖剥夺/再灌注(OGD/R) 4 h组(OGD4组)、OGD 4 h后复氧不同时间段组(OGD4+R6、OGD4+R12、OGD4+R18以及OGD4+R24组)、在OGD4 h后复氧阶段给予不同浓度(0. 01、0. 05、0. 1、0. 25、0. 5、1、2、5和10 mmol/L)α-LA共同复氧培养24 h作为α-LA处理组(OGD/R+α-LA组); Control组细胞在完全培养基、正常氧培养箱中培养,OGD/R组和OGD/R+α-LA组细胞按相应方法进行培养处理;蛋白免疫印迹法检测各组PC12细胞中内质网应激[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)]和凋亡[B淋巴细胞瘤-2相关X (Bax)、裂解型胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)]相关分子的表达;细胞活性检测试剂盒-8(CCK-8试剂盒)检测各组PC12细胞的存活率,分析α-LA作用的有效工作浓度。结果:与Control组比较,OGD4 h后复氧不同时间段均诱导了PC12细胞发生内质网应激性的凋亡,表现为内质网应激相关分子GRP78、CHOP和凋亡蛋白Bax、Cleavedcaspase3的表达伴随复氧时间段的延长而逐渐升高(P <0. 05),在OGD4+R24组升高最明显(P <0. 05);与Control组比较,OGD4+R24组细胞的存活率明显下降(P <0. 05);与OGD4+R24组比较,OGD/R+α-LA组α-LA在0. 05～5 mmol/L浓度范围内增加了细胞的存活率(P <0. 05),0. 5 mmol/L时细胞存活率升高最明显(P <0. 05),10 mmol/L时细胞存活率明显降低(P <0. 05);与OGD4+R24组比较,OGD/R+α-LA(0. 5 mmol/L)组凋亡分子Bax、Cleaved-caspase3以及内质网应激相关分子GRP78、CHOP表达明显降低(P <0. 05)。结论:缺血再灌注诱导了PC12细胞发生内质网应激性的凋亡,α-LA能够降低缺血再灌注诱导的PC12损伤,其机制可能与降低了缺血再灌注诱导的内质网应激性凋亡有关。

• 单位
  贵州医科大学