绵羊miR-150启动子的鉴定及生殖激素对其转录调控研究

作者：宋鹏琰; 李佳丽; 苗艳平; 李相运; 周荣艳^*; 锡建中

来源：畜牧兽医学报, 2019, 50(07): 1358-1366.

• miR-150启动子
• 生殖激素
• 绵羊
• 转录调控
• 颗粒细胞

旨在对绵羊miR-150基因的启动子进行鉴定以及探索生殖激素对miR-150启动子转录调控的影响。本研究利用生物学软件预测雌性绵羊(小尾寒羊)卵巢miR-150启动子区域及繁殖相关转录因子结合位点,构建重组质粒,并利用双荧光素酶报告基因检测miR-150的启动子活性。通过在无血清培养基内添加FSH、LH和E2,进行miR-150启动子重组质粒转染并检测miR-150启动子活性。结果,分别利用Promoter 2.0和PROMO软件预测出miR-150启动子区域和转录起始位点,并获得了与繁殖相关转录因子结合位点。所预测的绵羊miR-150启动子片段序列长度为582 bp,且成功构建miR-150启动子质粒,并确定绵羊颗粒细胞的最佳转染效率(脂质体∶质粒DNA=1∶1)和质粒最佳转染比例(50∶1),从而验证了所预测的区域具有启动子活性。此外,FSH、LH和E2处理组与对照组(无激素组)相比,miR-150启动子的活性均显著下调(P<0.05)。结果表明,生殖激素可以通过影响绵羊miR-150启动子活性来调控miR-150基因的表达,为miR-150调控卵泡发育的机制研究提供了新思路。

• 单位
  动物科技学院; 河北农业大学