猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

作者：史鑫琪; 季朝阳; 陈晓彤; 张子博; 张鑫; 郭慧娟; 田璐; 王洪峰; 陈洪岩; 王靖飞^*; 冯力^*; 夏长友^*; 孟庆文^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(01): 1-8.

• 猪氨基肽酶N
• 猪传染性胃肠炎病毒
• CRISPR/Cas9
• ST细胞

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N (pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响，本研究检索并分析p APN与TGEV的结合位点，结果显示，敲除p APN aa668～aa963对其酶活性无影响。因此，利用CRISPR/Cas9技术构建p APN与TGEV结合位点敲除细胞系，经PCR和western blot鉴定结果显示，正确构建一株敲除p APN aa668～aa963的ST细胞系，即敲除p APN 15-21外显子，命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性，结果显示，敲除p APN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-q PCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达，结果显示，敲除p APN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-q PCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化，结果显示，TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3 (NOD-like receptor protein 3) m RNA转录水平无显著变化，但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明，敲除p APN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制，但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化，TGEV不能进入敲除p APN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应，该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所