草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定

作者：朱晓真; 王俊亚; 贾钊; 王梓璇; 王邦杰; 邹钧^*

来源：水产学报, 2022, 46(08): 1487-1498.

• 草鱼
• Ⅱ型干扰素
• 重组蛋白
• 单克隆抗体
• 免疫分析

型干扰素(IFN-γ)是参与辅助性T淋巴细胞1 (Th1)免疫应答的关键细胞因子之一。为研究产生IFN-γ和干扰素-γ相关因子(IFN-γrel)的细胞来源及功能差异，实验构建原核表达质粒，在大肠杆菌DE3中表达草鱼(Ci)IFN-γ和Ci IFN-γrel重组蛋白。结果显示，重组Ci IFN-γ蛋白为可溶性蛋白，而Ci IFN-γrel蛋白则不可溶。通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度Ci IFN-γ和Ci IFN-γrel重组蛋白，免疫小鼠制备了单克隆抗体。通过Western blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体。研究表明Ci IFN-γ单克隆抗体与Ci IFN-γrel没有交叉反应，反之亦然，其中FITC标记的2株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析。此外，Western blotting分析显示，草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白。本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体，为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础。

• 单位
  上海海洋大学; 生命学院