结核分枝杆菌MPT83蛋白的表达纯化及其在免疫学诊断上的应用

作者：阮锦洋; 祁弋暄; 杜凤娇; 李浩

来源：中国热带医学, 2022, 1-10.

• 结核分枝杆菌
• MPT83蛋白
• 蛋白表达
• 免疫学诊断

目的 本试验旨在表达纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白，使用临床样本初步评估其在免疫学诊断结核病（Tuberculosis，TB）中的应用价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板，PCR扩增出mpt83基因，连接到pET-21a（+）中构建原核表达载体，转入感受态细胞DH5α，进行菌落PCR筛选阳性克隆。提取菌落PCR为阳性的菌株的重组质粒pET-mpt83，对其进行双酶切鉴定，并将阳性克隆进行测序。将测序正确的质粒转入BL21感受态细胞中进行诱导、表达后通过镍柱亲和层析法纯化。使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）以及免疫印迹（WesternBlot）鉴定纯化产物。用纯化MPT83蛋白免疫小鼠制备鼠多克隆抗血清。分别收集8例临床诊断结核性胸膜炎患者（TB）的胸水和血浆，8例腺癌患者（CA）的胸水和血浆以及8名健康对照者（HC）的血浆。采用间接ELISA法检测样本中识别MPT83蛋白的特异性抗体水平。结果 成功表达纯化出结核分枝杆菌MPT83蛋白。MPT83鼠多克隆抗血清效价可高达1:1280000。TB组血浆MPT83抗原特异性抗体水平显著高于HC组，（P均小于0.05），差异具有统计学意义；而CA组血浆中抗原特异性抗体水平与HC组之间无明显差异（P均大于0.05）。TB组和CA组的胸水与HC组之间均无明显差异（P均大于0.05）。利用ROC曲线分析不同稀释度下TB组血浆和HC组血浆OD值，曲线下面积均大于0.7，显示出较高的诊断效能。结论MPT83蛋白具有较高的抗原特异性和免疫原性，在结核病免疫学诊断方面具有很大的应用价值。

• 单位
  首都医科大学附属北京胸科医院; 北京市结核病胸部肿瘤研究所; 中国农业大学