亚细胞定位PTEN基因真核表达载体的构建与鉴定

作者：李洪凌; 朱向辉; 姜新; 曲雅勤; 李亮

来源：吉林大学学报(医学版), 2009, 35(06): 1057-1060.

DOI：10.13481/j.1671-587x.2009.06.002

• 亚细胞定位
• PTEN基因
• 质粒 subcellular
• PTEN gene
• plasmid

目的:构建人野生型亚细胞定位PTEN基因真核表达载体,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:以胎盘组织RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增目的基因片段。PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-PTEN质粒,进行酶切鉴定和测序。以T-PTEN质粒为模板,利用PCR技术将核定位信号(NSL)加入PTEN序列。PCR产物与T载体连接,转化大肠杆菌,获得T-NSL-PTEN质粒。真核表达载体pcDNA3.1及T-NSL-PTEN质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌,获得重组载体pcDNA3.1-NSL-PTEN,进行酶切和测序鉴定。结果:重组质粒PUM-PTEN酶切在120...

• 单位
  吉林大学第二医院; 复旦大学附属金山医院