截短型潜态相关肽对TGF-β诱导HSC-T6细胞增殖的影响

作者：于洋; 曹雅男; 宋旭东; 苏晓男; 史嘉翊^*; 吴丹^*

来源：牡丹江医学院学报, 2020, 41(04): 7-22.

DOI：10.13799/j.cnki.mdjyxyxb.2020.04.002

• TGF-β潜态相关肽(LAP)
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 增殖

目的原核表达并纯化重组截短型TGF-β潜态相关肽(latency associated peptide,LAP),观察其对转化生长因子TGF-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法 LAP各个片段重组蛋白小量培养经IPTG诱导表达,并通过Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE电泳检测。通过MTT法检测浓度分别为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL LAP-B对TGF-β诱导的HSC-T6细胞增殖作用的影响。结果成功诱导表达可溶性截短型重组蛋白LAP-B,大量培养后经镍柱亲和纯化获得目的蛋白,经SDS-PAGE检测为LAP截短型重组蛋白。MTT检测LAP-B在2～64μg/mL浓度范围内能抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,并随着LAP-B蛋白浓度增加HSC-T6细胞增殖抑制越显著。结论成功诱导表达及纯化截短型重组蛋白LAP-B,LAP-B抑制了TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,为后续研究LAP的抗肝纤维作用提供实验基础。

• 单位
  牡丹江医学院