通窍活血汤含药脑脊液调控ASK1/MKK4/JNK信号通路对OGD/R损伤HT22细胞的保护作用

作者：袁美玲; 张云; 汪光云; 吴倩; 王艳^*; 汪宁^*

来源：中国中药杂志, 2022, 47(19): 5274-5283.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20220509.701

• 通窍活血汤
• 脑脊液
• 氧糖剥夺/复糖复氧
• HT22细胞
• 细胞凋亡

该文探讨通窍活血汤含药脑脊液(TQHXD-CSF)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠海马神经元(HT22)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控ASK1/MKK4/JNK信号通路有关。将HT22细胞随机分为5组，分别为空白脑脊液组(control组)、OGD/R组、TQHXD-CSF组、凋亡抑制剂组(Z-VAD-FMK,20μmol·L-1)、TQHXD-CSF+凋亡抑制剂组。除control组外，其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模并分组给药。CCK8法检测HT22细胞活力，LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶释放量，倒置显微镜观察HT22细胞形态。Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA水平。再将HT22细胞随机分为6组，分别为control组、OGD/R组、si-NC组、si-ASK1组、TQHXD-CSF组、TQHXD-CSF+si-ASK1组。CCK8法检测细胞活力，细胞动态分析仪动态监测细胞增殖，Hoechst染色和流式细胞术检测HT22细胞凋亡情况，Western blot检测MKK4、p-MKK4、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Cyt C、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况。结果显示，与OGD/R组相比，TQHXD-CSF可以显著提高细胞存活率，改善细胞形态，降低Bax/Bcl-2、caspase-3蛋白和mRNA的表达量。当沉默ASK1后，与OGD/R组相比，TQHXD-CSF组细胞存活率显著提升，降低细胞荧光强度，降低细胞凋亡率，p-MKK4、p-JNK、p-c-Jun、Cyt C、Bax/Bcl-2和caspase-3的蛋白表达量减少，但其效果不及TQHXD-CSF+si-ASK1组。综上，TQHXD-CSF可抑制OGD/R损伤的HT22细胞ASK1/MKK4/JNK通路介导的细胞凋亡，对缺血再灌注神经元细胞损伤具有保护作用。

• 单位
  安徽中医药大学