稳定表达乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系的建立

作者：陈振师; 刘立科; 汪恩强; 李业南; 华荣虹

来源：中国预防兽医学报, 2011, (12): 920-923.

• 乙型脑炎病毒
• NS1蛋白
• 细胞系 Japanese encephalitis virus
• NS1 protein
• cell line

为建立稳定表达乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白的真核细胞系,本研究将编码JEV NS1蛋白的人工合成基因克隆到真核表达载体pCAGG-TK-neo中,构建了重组质粒pCAGG-opti-NS1。重组质粒经脂质体转染RK-13细胞,以含G418的选择性培养基选择培养,经细胞克隆纯化,以间接免疫荧光试验(IFA)筛选表达目的基因的细胞。结果表明,转染的RK-13细胞经G418加压及IFA筛选后,获得表达JEV NS1蛋白的阳性RK-13细胞系。经RT-PCR、western blot和IFA鉴定,该细胞系在传代至第15代后仍然可以稳定表达NS1蛋白。本实验获得了能够稳定表达JEV NS1蛋白的细胞...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 河北农业大学