含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究

作者：姜永萍; 李呈军; 张洪波; 步志高; 张芳芳; 邓国华; 于康震; 陈化兰

来源：中国预防兽医学报, 2005, (06): 3-6+11.

• HA基因
• 密码子优化
• 重叠延伸PCR
• 间接免疫荧光
• Westernblot检测 HA gene
• codon optimization
• over-lapping extension PCR
• indirect immunofluorescence
• Western blot analysis

不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异。为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24~48 h 293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westernblot证实上述2种表达质...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 农业部; 兽医生物技术国家重点实验室