柑橘碎叶病毒(CTLV)单克隆抗体的制备及其检测应用

作者：宋西娇; 段硕; 洪健; 周常勇; 周雪平; 吴建祥

来源：农业生物技术学报, 2017, 25(01): 165-172.

• 柑橘碎叶病毒(CTLV)
• 单克隆抗体
• 斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA)

柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是严重危害世界柑橘(Citrus reticulata)产业的重要病毒,也是柑橘脱毒苗生产上的重要检疫对象。为了建立以抗CTLV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心的检测CTLV的血清学方法。本研究以原核表达的CTLV外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经细胞融合、筛选和克隆获得3株(6C5,14E11和15F8)分泌抗CTLV单克隆抗体的杂交瘤细胞。分别制备3株杂交瘤细胞的单抗腹水,经鉴定单抗腹水的抗体类型及亚类均为Ig G1、κ链,单抗腹水的间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价达到10-6以上。三抗体夹心酶联免疫吸附实验(triple antibody sandwich ELISA,TAS-ELISA)和Western blot分析单抗特异性表明,3株单抗均与感染CTLV柑橘病叶有特异性免疫反应,而不与柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)及健康柑橘树叶反应。利用制备的单抗为核心建立能特异性地检测柑橘病叶中CTLV的斑点酶联免疫吸附实验(dot-ELISA)。灵敏度分析表明,以3株单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测病叶组织的灵敏度达1∶640(W/V,g/m L)。田间样品检测结果表明,建立的dot-ELISA方法能准确、可靠和灵敏地用于柑橘树中CTLV病毒的检测。本研究为我国柑橘树中CTLV的诊断、无毒苗的生产及科学防控提供了技术支撑。

• 单位
  浙江大学; 中国农业科学院柑橘研究所; 水稻生物学国家重点实验室; 西南大学