结核分枝杆菌Rv3425与Rv3614c的相互作用

作者：黄琪; 徐文玺; 粟海波; 李光华; 宋娜; 孔聪; **; 王洪海; 徐颖

来源：微生物与感染, 2015, 10(04): 235-240.

• 结核分枝杆菌
• Rv3425
• 免疫共沉淀
• 谷胱甘肽S-转移酶pulldown
• 蛋白质相互作用

为探究结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸(PPE)蛋白家族Rv3425的生物学功能,利用免疫共沉淀联合质谱分析,在卡介苗(BCG)中筛选与Rv3425相互作用的蛋白。首先,以聚合酶链反应(PCR)扩增获得Rv3425基因,并克隆于pMV261载体。将重组载体转化入BCG,裂解细胞,蛋白免疫印迹法证实目的蛋白可在BCG中表达。通过免疫共沉淀,用特异抗体分离出BCG中的Rv3425蛋白复合体,质谱鉴定其成分,在美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中检索各蛋白的功能,筛选与Rv3425相互作用的蛋白,并用谷胱甘肽S-转移酶(GST)pulldown验证。结果显示,免疫共沉淀联合质谱分析筛选到10个与Rv3425相互作用的蛋白,在细胞内Rv3425协同作用下参与肽聚糖合成途径、分枝菌酸合成途径、ESX-1蛋白分泌系统及细菌毒力调控。GST pulldown验证发现Rv3614c与Rv3425可体外结合。本研究证实Rv3425与Rv3614c存在相互作用,Rv3425可能与ESX-1蛋白分泌系统及结核分枝杆菌致病机制密切相关。

• 单位
  遗传工程国家重点实验室; 生命科学学院; 复旦大学