稳定表达荧光素酶的产酸克雷伯菌在评估不同灭菌方法中的应用

作者：滑明溪; 袁临天; 李昂^*

来源：中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2020, 14(04): 272-277.

• 产酸克雷伯菌
• 生物发光
• 荧光素酶基因

目的构建稳定表达荧光素酶基因(lux)的产酸克雷伯菌,旨在更直观地观察产酸克雷伯菌(K. oxytoca)在宿主体内的分布以及评估不同杀菌方法的效果。方法扩增p BAV1k-T5-Lux质粒的荧光素酶基因簇(Lux A/B/C/D/E),构建含有Lux A/B/C/D/E基因簇的p BBR1质粒(p BBR1-lux),并获得能够表达荧光素基因基团的大肠埃希菌(E. coli-p BBR1-lux)。将p BBR1-lux质粒电转化至产酸克雷伯菌感受态细胞,经荧光强度鉴定及菌株的3次传代,筛选能够稳定表达lux基因的产酸克雷伯菌(K. oxytoca-p BBR1-lux)。结果连接成功的环状质粒产物命名为p BBR1-lux。与大肠埃希菌对照株相比,含E. coli-p BBR1-lux的Luminesence荧光信号值显著升高[15 345(14 676,18 654) vs. 63(60,82)],差异具有统计学意义(t=21.14、P=0.035)。K.oxytoca-p BBR1-lux的Luminesence荧光信号值[399 303(265 245,617 192)]显著高于产酸克雷伯菌对照菌株[83(63.5,86.75)],差异具有统计学意义(t=7.07、P=0.014)。E. coli-p BBR1-lux和K. oxytoca-p BBR1-lux均能够在Veritas微孔板光度计和小动物成像仪上检测到Luminesence荧光信号。将所得菌株按照1︰10稀释6个梯度,荧光值检测结果显示,Luminesence值随菌落浓度降低而下降。多次传代后p BBR1-lux能够在产酸克雷伯菌中稳定表达荧光素酶,不同理化杀菌方法对产酸克雷伯菌杀菌效果不同,紫外线和84消毒液(10%)是最有效的杀灭产酸克雷伯菌方法。结论本研究获得了可被微孔板光度计和小动物成像仪检测到的稳定表达荧光素酶的K. oxytoca-p BBR1-lux。

• 单位
  首都医科大学附属北京地坛医院