新型冠状病毒S蛋白RBD区的重组猫疱疹病毒的构建及鉴定

作者：王凤杰; 周鑫韬; 齐宇; 韩桪; 蒋依倩; 陈腾; 扈荣良^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (23): 72-135.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.02.0202

• 新型冠状病毒
• 刺突蛋白
• 受体结合域
• 猫疱疹病毒Ⅰ型
• 免疫原性

为了开发一种猫用新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组猫疱疹病毒活载体疫苗，试验以猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)为病毒载体，采用同源重组技术将亲本病毒FHV-Z的gI和gE基因替换为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合域(RBD)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP蛋白)串联表达盒；利用Overlap PCR方法构建包含RBD-EGFP串联表达盒的重组质粒pUC19-RBD-EGFP,并用该重组质粒与FHV-Z基因组共同转染F81细胞，通过有限稀释法和绿色荧光病变灶筛选完成重组病毒rFHV-RBD的纯化；经PCR、测序、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot方法分析重组病毒rFHV-RBD;用1×107.0TCID50/mL的重组病毒rFHV-RBD滴鼻免疫猫，利用ELISA方法监测免疫后第0,7,14,21天猫体内特异性抗RBD抗体变化情况。结果表明：试验成功拯救了重组病毒rFHV-RBD,该重组病毒连续传代15代仍能检测到RBD-EGFP串联表达盒，遗传稳定性较好，重组病毒rFHV-RBD的生长特性与亲本病毒FHV-Z无明显差异，能够在重组病毒感染的F81细胞中正确表达S-RBD蛋白，滴鼻免疫猫后第21天特异性抗RBD抗体极显著升高(P<0.01)。说明试验获得的重组病毒rFHV-RBD具有良好的免疫原性，可用于开展猫新型冠状病毒肺炎疫苗的研究。

• 单位
  吉林农业大学; 中国农业科学院