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摘要
目的探讨尼古丁促进人支气管平滑肌细胞收缩的作用机制。方法体外培养原代人支气管平滑肌细胞,根据细胞是否经10-5mol/L尼古丁处理48 h分为对照组和尼古丁组,根据转染α7烟碱样受体(nAChR)siRNA序列或siNC序列分为siNC组、siα7nAChR组、siNC+尼古丁组和siα7nAChR+尼古丁组。胶原凝胶收缩实验检测尼古丁对细胞收缩功能的影响;蛋白免疫印迹法检测尼古丁对人支气管平滑肌细胞α7nAChR和TRPC6蛋白表达;钙离子成像系统检测尼古丁对细胞内钙离子水平的改变。采用t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果尼古丁组胶原凝胶面积为(24±8)%,明显低于对照组的(59±14)%,差异有统计学意义(t=3.78,P<0.05);尼古丁组α7nAChR蛋白表达为(173±16)%,明显高于对照组的(100±0)%,差异有统计学意义(t=-6.848,P<0.05)。siNC+尼古丁组胶原凝胶面积为(37±10)%,明显低于siNC组的(72±10)%,siNC+尼古丁组细胞内基础钙水平(1.04±0.02)、钙库调控钙内流(SOCE)水平(0.68±0.03)及受体调控钙内流(ROCE)水平(0.36±0.02)明显高于siNC组(分别为0.79±0.07、0.41±0.04、0.17±0.02),差异有统计学意义(均P<0.05)。siα7nAChR+尼古丁组胶原凝胶面积为(62±10)%,明显高于siNC+尼古丁组,siα7nAChR+尼古丁组细胞内基础钙水平(0.78±0.06)、钙库调控钙内流(SOCE)水平(0.39±0.05)及受体调控钙内流(ROCE)水平(0.15±0.02)明显低于siNC+尼古丁组(均P<0.05)。结论尼古丁可通过上调α7nAChR蛋白的表达,从而增加TRPC6蛋白的表达以及SOCE和ROCE水平,增加细胞内钙浓度,进而促进人支气管平滑肌细胞收缩。
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