P450cam突变体蛋白表达、纯化与结晶的改进及其四突变体(F87L/Y96F/L244A/V247A)晶体结构

作者：刘斌斌; 孙蕾; 徐峰; 娄智勇; 庞海; L.L.WONG; 刘一苇

来源：生物化学与生物物理进展, 2004, (07): 611-615.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3282.2004.07.007

• P450cam
• 四突变体
• 纯化
• 双波长检测
• 晶体结构

在P4 5 0cam突变体蛋白纯化过程中使用 2 80nm/ 392nm双波长比值检测蛋白质纯度 ,采用 β 巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护 ,有效地缩短了纯化进程 ,纯化效率相应提高 .以PEG 80 0 0为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的P4 5 0cam四突变体 (F87L/Y96F/L2 4 4A/V2 4 7A)晶体 ,在Mar Research面探测器系统上收集了0 2 2nm分辨率的X射线衍射数据 .采用同晶差值傅立叶法解析结构 ,最后的晶体学R因子和Rfree分别为 0 197和 0 2 4 7,键长偏差为 0 0 0 177nm ,键角偏差为 1 96°.结构测定显示P4 5 0cam四突变体 (F87L/Y96F/L2 4 4A/V2 4 7A)和P4 5 0cam野生型的整体构象无重大变化 ,突变后活性口袋变大而疏水性增加 ,这与突变设计预期目标一致 .

• 单位
  清华大学