应用白细胞cDNA文库的酵母双杂交技术筛选HCTP4结合蛋白基因

作者：刘敏成军张树林王琳邵清**梁耀东

来源：世界华人消化杂志, 2004, (04): 82-85.

• cDNA文库
• HCTP4
• 酵母双杂交技术
• 酵母表达载体
• 丙型肝炎病毒
• 蛋白结合
• DNA
• 免疫球蛋白
• 酵母细胞
• 多聚酶链反应

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与HCTP4蛋白结合的蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCTP4基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α), 提出质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出HCTP4基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基及铺有X-α- 半乳糖(X-α-gal)的四重缺陷培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落44个...

• 单位
  解放军第302医院; 西安交通大学