重组人p66Shc腺病毒抑制HeLa细胞增殖的机制研究

作者：杨晓姗; 林雅军; 魏洁; 胡刚; 徐蓉; 许晓东; 马桂蕾; 孙洪范^*

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(19): 1991-1995.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.19.019

• p66Shc
• HeLa细胞
• 活性氧
• p53

目的探讨重组人p66Shc腺病毒(AdenoⅩ-p66Shc)对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及机制。方法MTT法检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)生成;ELISA检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;AnnexinⅤ-FITC/PI荧光染色检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白表达;免疫共沉淀检测p66Shc与p53之间相互作用。结果重组人p66Shc腺病毒呈剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),而N-乙酰半胱氨酸能够阻断重组人p66Shc腺病毒的作用。p66Shc能引起细胞ROS水平显著上升(P<0.05),同时伴随8-OHdG含量的升高(P<0.05);p66Shc能引起p53蛋白和CyclinB1蛋白表达及p53磷酸化修饰(p-p53)显著升高(P<0.05),但免疫共沉淀实验结果显示p66Shc与p53并非直接结合,提示p66Shc通过其他信号分子间接调控p53的表达及活性。结论重组人p66Shc腺病毒通过使HeLa细胞ROS水平上升,引起DNA氧化损伤,从而诱导p53表达及其磷酸化修饰升高抑制HeLa细胞增殖。

• 单位
  卫生部北京老年医学研究所; 中国医学科学院生物医学工程研究所; 北京协和医学院; 卫生部北京医院