博尔纳病病毒荧光定量PCR试剂盒扩增缓冲液的优化

作者：金戈; 徐晓艳; 张亮; 马丽华; 黄荣忠; 邓婧; 李文娟; 房亮; 谢鹏

来源：第三军医大学学报, 2011, (13): 1323-1327.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2011.13.008

• PCR扩增缓冲液
• PCR试剂盒
• 博尔纳病病毒 PCR buffer
• PCR kit
• Borna disease virus

目的选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高。方法通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基氯化铵、TritonX-100、二甲亚砜和甜菜碱这4种常用的PCR添加剂,并确定各自的最佳工作浓度,选择扩增效果较好的添加剂与其他添加剂进行依次组合,寻找最佳的添加剂组合,最后用荧光定量PCR进行对比验证。结果在滴定酸上选择了效果最好的硫酸,配制TSS buffer硫酸铵的最佳终浓度...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学