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摘要
【背景】新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球流行已近3年，除对人类造成了巨大伤害，也影响了人类的伴侣动物。人的COVID-19疫苗已在全球应用，但动物用的新冠病毒疫苗却鲜有报道。【目的】研制兽用新冠病毒(severeacuterespiratorysyndrome coronavirus2,SARS-CoV-2)和狂犬病病毒(rabiesvirus,RABV)的二联苗。【方法】将合成的SARS-CoV-2S基因和S1基因分别克隆至RABV弱毒疫苗株rHEP-Flury基因组G与L基因间，并将2个重组质粒分别与辅助质粒共转染至BHK-21细胞中，拯救重组病毒r HEP-n COV-S和rHEP-nCOV-S1。通过RT-PCR、Westernblotting和荧光抗体染色，验证重组病毒、确证S和S1蛋白在RABV中成功表达。再将重组病毒接种NA细胞及成年小白鼠，测定病毒的体外生长特性、重组病毒的致病性及免疫原性。【结果】免疫荧光结果显示，转染7 d后细胞上清均出现了绿色免疫荧光，表明已成功拯救嵌合SARS-CoV-2S和S1基因的重组病毒RABVrHEP-nCOV-S和rHEP-nCOV-S1，并且rHEP-nCOV-S1的增殖和扩散能力强于亲本株rHEP-Flury，但rHEP-nCOV-S与亲本株无显著差异。Western blotting结果显示，在目的位置处均出现72 kDa和144 kDa特异性条带，表明S和S1蛋白在重组RABV中高效表达。重组病毒免疫6周KM小鼠后，小鼠的体重变化与亲本RABV基本一致，重组病毒诱导小鼠产生狂犬中和抗体。【结论】本研究拯救出了嵌合SARS-CoV-2 S/S1基因的重组RABV，为动物COVID-19载体疫苗的研发奠定了基础。
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