奥希替尼联合贝伐珠单抗对EGFR-TKIs耐药H1975细胞增殖的抑制作用及机制研究

作者：邓镇生; 林青; 田作春; 李才; 许静红^*

来源：广西医科大学学报, 2021, 38(06): 1136-1142.

DOI：10.16190/j.cnki.45-1211/r.2021.06.012

• 奥希替尼(AZD)
• 贝伐珠单抗(BEV)
• 人肺腺癌细胞H1975
• EGFR-TKIs
• 协同抑制

目的:探讨奥希替尼(AZD)联合贝伐珠单抗(BEV)对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药H1975细胞增殖的作用及可能的机制。方法:体外培养人肺腺癌细胞株H1975(E21 L858R/E20 T790M),并通过低浓度加量递增方法诱导建立EGFR-TKIs奥希替尼耐药株H1975/OR。将H1975和H1975/OR细胞分为空白组(不做任何药物处理)、AZD组(不同浓度AZD处理)、BEV组(不同浓度BEV处理)和AZD+BEV组(先加入不同浓度BEV,6 h后加入不同浓度AZD)。分别利用MTT法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡活性,并计算半数抑制浓度(IC50)和联合应用指数(CI)。Western blotting检测各组细胞EGFR、蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体S6蛋白激酶(p70s6k)、5-磷酸腺苷激酶(AMPK)蛋白及相应磷酸化蛋白表达量。结果:成功建立AZD耐药细胞株H1975/OR细胞,对AZD的耐药指数为90.57。AZD+BEV抑制H1975细胞增殖的CI分别为0.749、0.790、0.409、0.508、0.298、0.009,CI均<1;抑制H1975/OR细胞增殖的CI分别为0.375、0.111、0.068、0.229、0.592、0.105,CI均<1。AZD+BEV组H1975细胞和H1975/OR细胞凋亡率均高于空白组、AZD组和BEV组(P<0.05)。与空白组、AZD组和BEV组比较,AZD+BEV组H1975细胞和H1975/OR细胞p-EGFR、p-Akt、p-ERK、p-mTOR、p-p70s6k蛋白表达量降低,同时p-AMPK蛋白表达量升高。结论:AZD联合BEV可协同抑制H1975细胞和H1975/OR细胞的增殖活力,其作用机制可能是通过下调VEGF表达进而抑制EGFR及其下游PI3K/AKT/mTOR通路和AMPK/ERK/mTOR通路的磷酸化激活。