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摘要
目的：确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件，并探究其体外补肾健骨活性。方法：以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素，水解度为响应指标，在单因素实验的基础上，结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计，获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺；探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞（TM3）的存活率以及睾酮（Testosterone,T）的分泌影响和对成骨细胞（MC3T3-E1）的存活率、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活力以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）的分泌影响。结果：最佳酶解工艺条件为温度51℃，pH8.7，时间4.1 h，酶用量1300 U/g，此时水解度为40.36%±0.22%；体外活性实验结果表明，TM3细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较，均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌（P<0.05），并在50μg/mL质量浓度下，鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强，其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较，细胞存活率和ALP活力、OCN分泌都有显著提高（P<0.05），并在50μg/mL质量浓度下，ALP活力及OCN分泌作用最显著，ALP活力为6.80金氏单位/g prot,OCN分泌量为15.63 ng/mL。结论：本实验通过响应面法确定了鹿鞭肽的最佳酶解工艺，验证了鹿鞭酶解肽具有较好的体外补肾健骨活性，为以后鹿鞭的综合开发利用提供一定的理论基础。
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