摘要
目的:探讨中介素1-53(IMD1-53)对高磷诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)内质网应激(ERS)-线粒体凋亡通路及钙化的影响。方法:体外培养HA-VSMC,MTT法检测IMD1-53对HA-VSMC的毒性作用。HA-VSMC中添加10 mmol/L β-甘油磷酸盐进行高磷诱导,使用0.1 nmol/L或0.5 nmol/L IMD1-53干预,并在0.5 nmol/L IMD1-53干预基础上添加ERS诱导剂衣霉素(TM),流式细胞仪检测HA-VSMC凋亡率,茜素红S染色观察HA-VSMC中钙盐沉积,酞络合酮比色法测定HA-VSMC中钙含量,分光光度法检测HA-VSMC中碱性磷酸酶(ALP)活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测HA-VSMC中钙化以及ERS--线粒体凋亡通路相关蛋白表达。结果:IMD1-53浓度≤2.5 nmol/L时,对HA-VSMC细胞活力无明显影响(P>0.05),故选择对细胞无明显毒副作用的低、高2个剂量(0.1、0.5 nmol/L)进行后续实验。高磷诱导后,HA-VSMC凋亡率、钙含量、ALP活性以及Runt相关转录因子-2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、感受器活化转录因子6(ATF6)、p-需肌醇酶1(IRE1)/IRE1蛋白表达水平升高(P<0.05),橘红色结节明显增多,骨保护素(OPG)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平降低(P<0.05)。0.1 nmol/L和0.5 nmol/L IMD1-53干预处理均可降低HA-VSMC凋亡率、钙含量、ALP活性以及Runx2、OPN、Bax、cleaved caspase-3、GRP78、CHOP、ATF6、p-IRE1/IRE1蛋白表达水平(P<0.05),明显减少橘红色结节,升高OPG、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。ERS诱导剂TM可升高HA-VSMC中GRP78、CHOP、ATF6、p-IRE1/IRE1蛋白表达水平,并减弱IMD1-53抑制高磷诱导的HA-VSMC ERS、凋亡和钙化的作用。结论:IMD1-53可减轻高磷诱导的HA-VSMC钙化,其作用机制可能与抑制ERS-线粒体凋亡通路激活,减少细胞凋亡有关。
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单位山西省中西医结合医院; 山西省心血管病医院